Foi fundada pelo Cardeal-Infante D. Henrique em 1559 e nela exerceram o magistério ou viveram personagens da maior projecção cultural e religiosa do mundo português. Monumentais são o claustro renascentista e a sala dos actos.
O templo do Espírito Santo, de planta maneirista, inspirado na Igreja de Gésu, de Roma, do arquitecto Vignola, o qual transmitiu a sua traça, através dos missionários jesuítas, aos domínios portugueses da Índia e do Brasil.
A Universidade de Évora foi a segunda universidade a ser fundada em Portugal. Após a fundação da Universidade de Coimbra, em 1537, fez-se sentir a necessidade de uma outra universidade que servisse o sul do país.
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